引言 Introduction

　　抗体偶联药物（ADC）是一类将抗体和细胞毒性的小分子药物通过连接子偶联而成的生物药。在其偶联反映历程中，反映时长和底物当量等因素会直接影响要害质量属性DAR值。历程分析技术（PAT）为实时追踪ADC的生物偶联历程提供了解决方案。近期，PA团体官方网站的相助同伴默克发表相关文章“Process Analytical Technology for Real-Time Monitoring of Pharmaceutical Bioconjugation Reactions”，论述了一种利用疏水相互作用色谱（HIC）技术实时监测ADC偶联反映的创新要领，文献中接纳高疏水性色谱柱Proteomix HIC Phenyl-NP5，实现对裸抗和差异DAR值样品的高效疏散，为ADC药物的研发提供了更精确、高效的监测手段。

配景介绍

　　随着生物医药工业的蓬勃生长，历程分析技术（PAT）已成为监测药物生产历程的重要措施，通过对生产历程中的要害参数进行实时监控和分析，实时发现并纠正潜在问题，从而确保最终产物的质量和宁静性。近年来，多种分析技术已被应用于ADC药物DAR值的分析与表征，其中，HIC法以分辨率高、色谱条件温和等特点脱颖而出，它的作用机理主要是利用ADC药物与未偶联抗体在疏水性上的差异进行疏散，疏水性低的未偶联抗体首先被洗脱，偶联小分子后的ADC疏水性增加，洗脱时间延迟。且HIC法能够精确地捕捉到载药量的细微差异，故通常作为检测ADC药物漫衍、裸抗含量及平均DAR值的尺度要领。

文章概述

　　文献中ADC药物的生物偶联反映（Bioconjugation Reaction）选择极性非质子溶剂DMSO（二甲亚砜），可有效溶解疏水性较强的小分子药物及部门亲水性身分，提供了一个理想的偶联反映体系。当还原后的单克隆抗体（mAb）进入该体系时，原本由二硫键连接的游离半胱氨酸残基得以释放，与马来酰亚胺连接子的活性基团发生特异性反映，形成了稳定的硫酯键。研究中探索了一种偶联反映的HIC-HPLC监测要领，结合PAT技术对实验参数进行精准调治，并接纳Proteomix HIC Phenyl-NP5色谱柱进行分析，该色谱柱牢固相为苯基键合聚苯乙烯/二乙烯基苯（PS/DVB），具有高疏水性，准确监测反映历程中DAR值变化，从而实现控制终产物反映至理想状态的目标。

　　实验方案

　　Column: Proteomix HIC Phenyl-NP5（5μm, 4.6x100 mm）

　　Sample: Small Molecule Conjugation

　　Mobile Phase: 

　　A:3M ammonium acetate, 50mM potassium phosphate, 5% acetonitrile, pH 7.0

　　B: 5% acetonitrile

　　Flow Rate: 0.25 mL/min

　　Temperature: 30°C

　　Detection: UV at 280 nm

　　Amount: 50 μg

图1.偶联历程中形成的三种DAR组分的疏水相互作用色谱（HIC）疏散

　　图1代表偶联反映中mAb与差异当量LP（Linker-Payload）生成的3种DAR产物经Proteomix HIC Phenyl-NP5的疏散效果。A对应mAb与差异当量的LP反映生成的产物，图B、C、D色谱图划分对应低、中、高当量LP的反映结果，色谱图中黄色、蓝色和紫色星星划分对应 DAR0、DAR1和 DAR2。凭据各当量的平均DRA值，可以得出要想到达目标DAR值2.0，必须接纳高当量LP进行偶联反映。

实验结论

　　综上所述，Proteomix HIC Phenyl-NP5分析要领不仅能有效监测ADC药物偶联反映历程，还可评估差异当量LP的反映效果，有助于优化ADC药物的生物偶联反映条件，以到达期望的目标DAR值，同时可降低下游纯化难度，这对于ADC药物合成工艺重要的意义。

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